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  往预先包被(PLGA)elisa检测,人纤溶酶原激活剂捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的(PLGA)elisa检测,人纤溶酶原激活剂呈正相关。用酶标仪在450nm

  1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8C1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  1.试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。

  2.加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法zui好是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理

  3.洗板时容易造成误差:因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以zui好多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动

  4.显色问题:使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况

  5.终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,永利网站赌场造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒

  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100L,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350L),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

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